紫外分光光度計分為單波長及雙波長兩大類,其中單波長分光光度計,又可分為單光束和雙光束兩類。下面繼續(xù)介紹各類光度計。
單波長單光束紫外分光光度計:
單波長單光束分光光度計是分光光度計中光路設(shè)計最簡單的一種,它只有一條光束,通過變換參比和樣品的位置,使其分別進(jìn)入光路。在參比進(jìn)入光路時,調(diào)零。然后將樣品移進(jìn)光路,樣品信號自動減去參比信號,就可在電流表上或數(shù)字顯示器上讀出樣品的透光度或吸光度。單波長單光束儀器的單色器,有用棱鏡的,也有用光柵的。
單波長雙光束紫外分光光度計
單波長雙光束紫外分光光度計,是近30年來開發(fā)的一種分光光度計。雙光束就是在同一儀器中使用了兩個完全相同的光束。這兩個光束同時分別地通過參比溶液和待測溶液,以測量它們的透光度之差。
這種分光光度計由于采用雙光路方法,因此測定程序大為簡化,即可直接讀數(shù),又可掃描吸收光譜,還可以增加附件,擴(kuò)展儀器的使用范圍。此外,雙光束方法還可以排除由于光強(qiáng)度不穩(wěn)定而引入的誤差。
雙光束儀器型號較多,按其結(jié)構(gòu)、性能、使用及應(yīng)用新技術(shù)的情況,可分為低、中、高檔儀器。低中檔儀器可作為一般測定,使用方便,例如上海光譜SP-1901,高檔雙光束儀器都是利用微機(jī)操作和數(shù)據(jù)處理。上海光譜SP-1900、上海光譜SP-1920、上海光譜SP-2500便屬于此類。
雙波長雙光束紫外分光光度計:
雙波長儀器主要測定渾濁樣品。渾濁樣品溶質(zhì)顆粒造成的光散射,使表觀吸光度增加,甚至引起光譜畸變。為了探索測定渾濁樣品的方法,1951年Chance實驗室巧妙的利用樣品在峰位和峰谷的吸光度之差,準(zhǔn)確的測定了樣品的真實吸光度,設(shè)計了第一臺雙波長分光光度計。
隨著技術(shù)的發(fā)展,雙波長分光光度計常常同時可做雙光束測定。測定時,一個單色器被光閘關(guān)掉,另一單色器的光束由斬波器分成兩路,進(jìn)行雙光束測定。
由于雙波長雙光束儀器是把兩個不同波長的單色光,通過同一樣品后照射到同個檢測器上。因此,它提供了單位時間內(nèi)來自兩個波長的信號。記錄了兩個不同波長的光吸收差,從而能對樣品進(jìn)行精確地測定,或跟蹤樣品隨時間發(fā)生的變化。